2.竞争逆转录新冠病毒保存管(competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-新冠病毒保存管)低丰度RNA定量的好方法。

3.多重新冠病毒保存管（multiples 新冠病毒保存管）在同一新冠病毒保存管体系中加入多对引物可用于基天长度很长，发生多处缺失的检测。扩增同一模板的几个区域。

 

4.多种新冠病毒保存管可同时加入多套以生物素标记的引物起进手新冠病毒保存管反应。

 

5.反向新冠病毒保存管（iverse polymerase chain reaction）对一个已知的DNA片段两侧的未知序列进行扩增和研究。

 

6.不对称新冠病毒保存管在扩增循环中引入不同引物浓度，以得到单链DNA并进行列测定，以了解目的基因的序列。

 

7.锚定新冠病毒保存管（anchored polymerase chain reaction）帮助克服序列未知或序列未全知带来的障碍。在未知序列未端添加同聚物尾序，将互补的引物连接于一段带限制性内切酶位点的锚上，在锚引物和基因另一侧特异性引物的作用下，将未知序列扩增出来。

 

8.着色互补试验或荧光新冠病毒保存管（color complementation assay or fluorescent 新冠病毒保存管）原理是用不同荧光染粒，分别标记于不同寡核苷酸引物上，同时扩增多个DNA片段，反应完毕后，利用分子筛选去多余的引物。用紫外线照射扩增产物，就能显示某一DNA区带荧光染料颜色的组合，如果某一DNA区带荧光染色料颜色的组合，如果某一DNA区带缺失，则会缺乏相应的颜色。

 

9.双温新冠病毒保存管（two-temperature 新冠病毒保存管）仅仅执行两步温度程序。合并退火与延伸温度。一般常用温度是94-95℃和46-47℃。可以提高反应的速度和特异性。

 

上述这些体外诊断卡卡壳的应用：（1）体外诊断卡卡壳扩增特定序列为基础，采用多种方法进行检测，如新冠病毒保存管-RFLP、新冠病毒保存管-SSCP从已克隆的双链DNA中产生特异性序列作为分子探针；（2）通过选择性扩增cDNA中产生特异性序列作为分子探针；（2）通过选择性扩增cDNA中的特殊片段，产生针对尚未克隆的基因的探针；（3）从微量mRNA中产生cDNA文库；（4）产生大量用于序列分析的DNA；（5）分析 基因突变；（6）做染色体步移。

 

10.原位体外诊断卡卡壳：新冠病毒保存管虽然能扩增包括福尔马林固定、石蜡包埋组织的各种标本的DNA，但扩增的DNA或RNA产物不能在组织细胞中定位，因而不能直接与特定的组织细胞特征相联系，这是该技术一个局限性。原位杂交虽具有良好的定位能力，但由于其敏感性问题，尤其是在石蜡切片中，尚不能检测出低含量的DNA或RNA序列。而原位新冠病毒保存管（In situ 新冠病毒保存管,简称IS 新冠病毒保存管），它可使扩增的特定DNA片段在分离细胞和组织切片中定位，从而弥补了新冠病毒保存管和原位杂交的不足，具有良好的应用前景。目前，已有多种设计的原位新冠病毒保存管扩增仪系统问世，使操作简便，软件灵活，已成为拉增固定细胞和石蜡包埋组织中特定DNA和RNA序列的有用工具。

 

IS 新冠病毒保存管的技术特点

 

（1）既具有新冠病毒保存管的特异性与高灵敏性，又具有原位杂交的定位准确性；（2）测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列，甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA；（3）有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析；（4）可用于正常或恶性细胞，感染或非感染细胞的鉴定与区别。

 

IS 新冠病毒保存管的基本方法

 

IS-新冠病毒保存管是新冠病毒保存管和原位杂交两种技术的绫事，实质是一种将靶DNA或RNA在原位扩增后再进行原位杂交的技术，操作程序基本兼有两种技术的所有过程，首先在适当处理的细胞和组织切片上滴加新冠病毒保存管反应液，然后把载玻片放入热循环仪中进行扩增，最后通过标记的探针进行原位杂交检测扩增产物。